PRACTICA 24: RECUENTO DE LEUCOCITOS Y HEMATIES.

PRACTICA NUMERO 24

02/03/2018

OBJETIVOS:

Consiste en hacer el recuento en una dilución de sangre entera anticoagulada. Es un método poco usado debido al elevado error que presenta.

FUNDAMENTOS:

La técnica consiste en diluir sangre anticoagulada con EDTA , en líquido de Turck y el recuento de las células mediante hemocitómetro o cámara de recuento utilizando un microscopio óptico.

Para calcular el valor total de recuento tendremos en cuenta la dilución usada , el área contada y la altura de la cámara utilizada.

APARATAJE:

• Microscopio.

REACTIVOS:

• Líquido de Turck (2mL ácido acético glacial,que rompe los hematíes;  1mL de violeta de genciana, que tiñe el núcleo de los leucocitos al 1% y 100 mL de agua destilada).

MATERIALES:

• Tubos eppendorf
• Pipetas de 20 microlitros
• Cámara de Neubauer
• Sangre anticoagulada o capilar
• Papel de filtro

PROCEDIMIENTO:

1.Preparamos un tubo eppendorf con 0,38 ml de líquido de Turck.

2.Pipeteamos 20 μL de sangre en el tubo eppendorf. Haremos  una dilución 1/200.

3.Tapamos el tubo y mezclamos suavemente .

4.Montamos la cámara,llenándola por capilaridad (sobre unos 10 μL).

5.Dejamos reposar durante 5 minutos para que sedimenten los leucocitos.

-Contar los leucocitos presentes en 16 cuadros , de los 4 cuadros grandes situados en las esquinas de la cámara.

Contaremos solo los leucocitos que se situen sobre las líneas superior y derecha.

PRACTICA 23: RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA.

PRACTICA NUMERO 23

19/02/2018

OBJETIVOS:

Determinar la resistencia osmótica eritrocitaria.

UTILIDAD CLINICA:

La resistencia osmótica eritrocitaria (ROE) o fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) es una técnica realizada para el estudio de las membranopatias eritrocitarias. Debido a su forma biconcava, los eritrocitos pueden aceptar, sin producir hemolisis, una entrada de agua capaz de aumentar su volumen hasta el 70%.

FUNDAMENTO:

Someter a los hematies a una serie de soluciones salinas hipotonicas de concentracion creciente determinando, a continuacion, el grado de hemólisis en cada una de ellas. En condiciones normales y empleando sangre sin incubar, la hemolisis se inicia a la concentracion de NaCl de 5.5g/L y es practicamente total a la de 3g/L

Esta prueba, auqneu muy util puede verse influida por diversos factores que a aveces dificultan su interpretacion, destacando reticulocitos y la eventual coexistencia de hipocromía.

APARATAJE:

• Espectrofotometrica.

REACTIVOS:

• Solución madre de NaCl de 100 g/L en agua bidestilada
• Soluciones de trabajo.

MATERIALES:

• Muestra de sangre total anticoagulada.
• -Tubos de centrífuga

PROCEDIMIENTO:

1.A partir de la solución madre preparamos las siguientes soluciones de trabajo:

-Solución 1 (1 g/L de NaCl) : 1 mL sol. madre + 99 mL de agua bidestilada

-Solución 2 (3 g/L de NaCl) : 3 mL sol. madre + 97 mL de agua destilada

-Solución 3 (4 g/L de NaCl) : 4 mL sol. madre + 96 mL de agua destilada

-Solución 4 (5 g/L de NaCl) : 5 mL sol. madre + 95 mL de agua destilada

-Solución 5 (6 g/L de NaCl) : 6 mL sol. madre + 94 mL de agua destilada

-Solución 6 (8 g/L de NaCl) : 8 mL sol. madre + 92 mL de agua destilada

-Solución 7 (10 g/L de NaCl) : 10 mL sol. madre + 90 mL de agua destilada

2. Colocamos 5 mL de cada solución en una batería de tubos de centrífuga .

3. Añadimos 25 microlitros de sangre total, agitamos y dejamos a temperatura ambiente durante 45-60 minutos.

4. A continuación centrifugamos a 3000 rpm durante 10 minutos y separamos el sobrenadante.

5. Medimos el grado de hemólisis del sobrenadante en un espectofotómetro a una longitud de onda de 540 nm, considerando el tubo con 1 g/L de NaCl como el 100% de hemólisis y el de 10 g/L de NaCl como el blanco (0% de hemólisis).

RESULTADOS:

 Por último representamos en un papel milimetrado ( en excel) en abscisas los g/L de NaCl  , y en ordenadas el porcentaje de hemólisis de los diferentes tubos , por interpolación se determinan cuál es la concentración de NaCl necesaria para producir una hemólisis del 50 % (H50) , siendo ese valor equivalente a la FOE

Los valores normales están comprendidos entre 3,6-4,2/L NaCl.

PRACTICA 22: CFTH

PRACTICA NUMERO 22

2/03/2018

OBJETIVO:

Reactivo saturante- precipitante de capacidad de fijación.

UTILIDAD CLÍNICA:

El hierro es el constituyente de un gran número de enzimas. La mioglobina, proteína muscular, contiene hierro, así como el hígado.

El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula que transporta el oxígeno en el interior de los glóbulos rojos.

El hierro se controla, normalmente, junto con la capacidad de fijación total de hierro y nos indica la capacidad de unión sérica disponible.

Encontramos niveles altos de CFTH en la anemia ferropenica.

FUNDAMENTOS:

La transferrina sérica se satura con un exceso de Fe y el exceso no fijado se elimina por precipitación con carbonato magnesico, determinándose a continuación la cantidad total de hierro presente.

La diferencia entre la capacidad de fijación total de hierro hallada y el hierro sérico inicial nos da la capacidad de fijación de hierro no saturado o residual.

APARATAJE:

• Espectrofotometrica.

REACTIVOS:

• R5 ( Solucion Saturante ).
• R6 ( Agente precipitante ).

MATERIALES:

• Suero o plasma heparinizada.
• Pipeta y puntas de pipeta.
• Cubetas de espectrofotometria.
• Tubos de ensayo.

PROCEDIMIENTO:

1.Pipetear en los tubos: 0.5 ml de muestra + 1 ml R5.

2.Mezclar bien e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.

3.Añadir a cada tubo: 3 dosis de R6.

4.Mezclar e incubar a 10 minutos a temperatura ambiente.

5.Centrifugar 15 minutos a 3000 rpm.

6.Recoger el sobrenadante y procesar como una muestra para la determinación de hierro.

RESULTADOS:

El calculo que queda es:

CFTH:  0.010 umol/L

OBSERVACIONES:

Hay que tener maximo cuidado  porque los resultados se realizan junto con el protocolo del hierro para saber la determinacion de CFTH.

PRACTICA 21: HIERRO

PRACTICA NUMERO 21

16/02/2018

OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de hierro.

UTILIDAD CLÍNICA:

El hierro es el constituyente de un gran numero de enzimas. La mioglobinas, proteínas muscular, contiene hierro, así como el hígado.

El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula que transporta el oxigeno en el interior de los glóbulos rojos. Su déficit causa anemia ferropenica. Se encuentras niveles elevados de hierro en la hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda y en concentraciones altas de transferrina. La variación día a día es común en poblaciones sanas.

FUNDAMENTOS:

El hierro se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil. El hierro libre se reduce a ion ferroso mediante el ácido ascórbico. Los iones ferrosos en presencia de FerroZine forma complejo coloreado.

APARATAJE:

• Espectrofotometro.

REACTIVOS:

• R1 ( Tampón ).
• R2 ( Reductor ).
• R3 ( Color ).
• IRON CAL.

MATERIALES:

• Pipeta y puntas de pipeta.
• Cubetas de espectrofotometria.
• Tubos de ensayo.

PROCEDIMIENTO:

1.Preparar el RT, disolver el tubo R2 con un frasco de R1 Tampón.

2.Pipetear en diferentes tubos de ensayo:

      -Blanco reactivo: 1ml RT + 3 gotas de R3 + 200ul agua destilada.

      -Patrón: 1 ml RT + 3 gotas de R3 + 200 ul de patrón.

      -Blanco muestra: 1 ml RT + 200ul muestra.

      -Muestra: 1 ml RT + 200 ul muestra.

3.Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC.

4.Leer las absorbancias de Patron y la muestra frente al blanco de reactivo.

RESULTADOS:

-Blanco reactivo: 0.02.

-Patrón: 0.068.

-Blanco muestra: 0.022.

-Muestra: 0.071.

*Por tanto se realiza el siguiente calculo:

Muestra-Blanco muestra-Blanco Reactivo/ (Patron -blanco reactivo) =114.2UL/dl de hierro.

OBSERVACIONES:

El color es estable como minimo 30 minutos.

PRACTICA 20: CROMATOGRAFIA

PRACTICA NUMERO 20

14/02/2018

OBJETIVOS:

Determinacion de hemoglobina mediante el intercambio ionico sin interferencia.

FUNDAMENTOS:

Después de preparar un hemolizado, las hemoglobinas son retenidas por una resina de intercambio aniónico. La hemoglobina A2 se eluye de forma especifica bajo estrictas condiciones de pH y fuerza ionica, cuantificándose por lectura fotométrica a 415 nm.

APARATAJE:

• Fotometro.

REACTIVOS:

• Reactivo 1.

MATERIALES:

• Microcolumna.
• Sangre total.
• Pipetas y puntas de pipeta.
• Tubos de ensayo.
• Cubetas de espectrofotometria.

PROCEDIMIENTO:

1.Invertir la cromatografia 10 minutos para compactar la resina y luego volver a volcar para sedimentar y dejarlo reposar unos minutos para que vuelva a su estado original.

2.Compactar el disco con una punta de pipeta con cuidado y abrir la tapa inferior y dejar caer el liquido sobre un tubo de ensayo.

3.Preparar en un eppendorf 50 microlitros de sangre y 200 microlitros de reactivo 1, agitar y dejarlo a temperatura ambiente durante 15 minutos.

5.Cuando ha caido todo el conservante de la cromatografia introducir 50 microlitros de sangre hemolizada sobre el disco superior.

6.Cuando haya penetrado todo el hemolizado añadir 200 microlitros de reactivo 1.

7.Dejar gotear hasta que el reactivo 2 alcance el disco superior y desechar diluido.

8.Pipetear 3 ml de reactivo 1 y dejar gotear hasta que el reactivo 2 a alcanzado el disco superior y recoger diluido.

10.Agitamos el diluido y leer absorbancia a 415 nm frente a agua destilada.

11.Para preparar el patron, preparamos un tubo con 12 ml de agua destilada y 50 microlitros de hemolizador y agitar ( Se preparan dos para toda la clase).

12.Se lee abosrbancia del patron a 415 nm frente a agua destilada.

PRACTICA 19: VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR.

PRACTICA NUMERO 19

14/02/2018

OBJETIVOS:

La velocidad de sedimentación globular (VSG), eritrocitaria o eritrosedimentación, mide la precipitación o sedimento de los hematíes en un tiempo determinado.

UTILIDAD CLINICA:

Esta prueba permite detectar estados de desequilibrio físico-químico como consecuencia de alteraciones orgánicas sobre todo de tipo infeccioso e inflamatorio. Aunque hay que tener en cuenta que hay diversas causas no patológicas que pueden aumentar la VSG.

MATERIALES:

• Sangre venosa anticoagulada con citrato sódico al 3’8% en proporción 4:1.
• Pipetas de Westergreen.
• Soporte para mantenerlas verticalmente.

PROCEDIMIENTO:

1.Agitamos el tubo con sangre anticoagulada para mezclarla bien.

2.Introducimos la pipeta a través del tapón del tubo y esperamos hasta que se llene todo el tubo de sangre, con cuidado de no introducirla con mucha fuerza.

3.Esperamos 2 horas y medimos cuando pase una hora y cuando pasen dos horas.

RESULTADOS:

Para el cálculo es necesario el índice de Katz = (VSG 1ª hora + (VSG  2ª hora/ 2)) / 2

La primera hora bajó hasta 7 mm.)

La segunda hora bajó hasta los 18 mm. 

Por lo tanto:18/2 = 9

(7 + 9) / 2 = 8 –> Por lo tanto, nuestro índice de sedimentación globular es de 8 mm/h.

Los valores normales son inferiores a 15 mm/h en hombres y 20 mm/h en mujeres. Por lo tanto dicho valor se encuentra dentro de los valores normales.

PRACTICA 18: DETERMINACION DE HB EN SANGRE PERIFERICA.

PRACTICA NUMERO 18

12/02/2018

OBJETIVOS:

Realizar la determinacion de la hemoglobina mediante una tecnica colorimetrica.

UTILIDAD CLÍNICA:

La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.

Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias. Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatias, deshidratacion o estancia en lugares de gran altitud.

FUNDAMENTOS:

Consiste en la oxidación de la hemoglobina por la acción del ferrocianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina, por lo tanto la intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.

APARATAJE:

• Espectrofotometro.

REACTIVOS:

• Reactivo Drabkin.

MATERIALES:

• Pipetas y puntas de pipeta.
• Cubetas de espectofotometria.
• Tubos de ensayo.

PROCEDIMIENTO:

1.Se preparan 3 tubos de ensayo:

         -Blanco: 5ml Reactivo Drabkin.

         -Muestra: 5ml Reactivo Drabkin + 20 ul muestra problema.

         -Patron: 5 ml Reactivo Drabkin +20 ul de patron.

2.Se leen en el espectrofotometro.

RESULTADOS:

Patrón = 0.394

Muestra = 0.330

(A.muestra  / A.patrón ) x 15  = g/dL de hemoglobina en la muestra.

Por lo tanto: (0.479/ 0.390) x 15 = 12,56g/dl

Los valores de referencia en hombre son de 14-18 g/dL  mientras que en mujeres es de 12-16 g/dL.

Los valores de hemoglobina están dentro de los valores.

PRACTICA 17: HEMATOCRITO

PRACTICA NUMERO 17

02/02/18

OBJETIVOS:

Metodo directo, determinacion del hematocrito.

UTILIDAD CLINICA:

Se utiliza para cuantificar el volumen medio de hematies presentes en sangre.

FUNDAMENTOS:

El hematocrito es el volumen que ocupan los hematíes con respecto al volumen total de sangre. Se expresa en %, es decir cm3 o ml de hematíes que hay en 100 cm3 de sangre.

APARATAJE:

• Centrifuga de hematocrito.

MATERIALES:

• Capilar desechable
• Lanceta
• -Plastilina
• -Gasas
• -Lector de microhematocrito o regla milimétrica.

PROCEDIMIENTO:

1. Con una lanceta puncionamos en un dedo, que previamente ha sido desinfectado con alcohol.

2. A continuación, ponemos el tubo capilar en contacto con la sangre hasta que se llene por capilaridad 2/3 partes.

3. Taponamos el extremo del capilar más próximo a la sangre con plastilina.

4. Colocamos el tubo en posición opuesta de otro tubo en los surcos radiales del plato de la centrífuga, de forma que el extremo sellado con plastilina quede en la parte exterior.

5. Cerramos la tapa de la centrífuga, ajustamos la velocidad a 12.000 rpm durante unos 5 minutos.

6. Procedemos a realizar la lectura mediante lector de microhematocrito o bien, con una regla milimetrada.

RESULTADOS:

Medición con la regla: 

L1= 4,1

L2= 1,7

Hematocrito (%)= (1.7/4)*100 = 42,5€ de hematies

-Valores normales:

El valor medio en hombres es de 40% a 50%

El valor medio en mujeres es de 37% a 47%

El valor medio del recién nacido es de 44% a 64%

Me encuentro dentro de los valores normales.

PRACTICA 16: FIBRINOGENO

PRACTICA NUMERO 16

26/01/2018

OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de Fibrinogeno.

UTILIDAD CLINICA:

El fibrinógeno, proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coagulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismo de coagulación.

La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario se observan valores bajos en terapias tromboliticas…etc.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTOS:

El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina.

El tiempo de formación del coagulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

APARATAJE:

• Coagulometro o cronometro.
• Baño María a 37ºC.

REACTIVOS:

• -R1: Trombina bovina.
• -R2: Tampón Imidazol, Azida sódica.
• -R3: Solucion Caolín.

MATERIALES:

• -Pipeta y puntas de pipeta.
• -Tubos de ensayo.
• -Muestra.

PROCEDIMIENTO:

1.Primero hay que reconstituir en 2 ml de agua destilada el reactivo R1, tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

2. Se prepara una dilución 1/10 de la muestra y los controles en Tampon imidazol.

Por tanto se quedaría de tal manera: 50ul de muestra o control + 450ul de Tampón Imidazol.

3.Despues se preparan las siguientes diluciones del calibrador en Tampón Imidazol.

Dilución del Calibrado	1/40	1/30	1/20	1/10	1/5
Tampón Imidazol (ml)	3.9	2.9	1.9	0.9	0.4
COAGULATION (ml)	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
Factor	10/40*	10/30*	10/20*	10/10*	10/5*
Concentracion (mg/dl)	0.25 x c	0.33 x c	0.5 x c	1 x c	2 x c

4. A 0.2 ml de cada dilución se añade 20ul de R3 y atemperar a 37ºC durante 5 minutos.

5.Se colocan todos los tubos en el coágulometro y se le añade la bolita metalica.

6.Se añade 0.1  ml de R1 y cronometrar la formación de coágulos. No atemperar la trombina R1.

RESULTADOS:

Para saber la concentración de cada tubo y saber que nos puede dar cada tubo he realizado los siguientes cálculos.

-1/40¬ 0.25 x 200 : ( 50 )

-1/30¬ 0.33 x 200 : ( 66 )

-1/20¬ 0.5 x 200: (100)

-1/10¬ 1 x 200 : (200)

-1/5¬ 2 x 200 : ( 400)

Tener en cuenta que, a mayor concentración de fibrinógeno, menos tiempo tardará en coagular.

- Dilución 1/40 = 109,6 mg / dL

- Dilución 1/30 = 97,5 mg/ dL

- Dilución 1/20 = 71,2 mg / dL

- Dilución 1/10 = 31,9mg/ dL

-Dilución 1/5= 20,3 mg7dl.

- Muestra Lorena = 30,9.

- Muestra Yosrra = 10, 5.

- Muestra Mari = 61,8.

-CURVA DE CALIBRACIÓN.

OBSERVACIONES:

La muestra es plasma obtenido por puncion venosa diluido al 1/10 en solución de citrato trisódico 3,8%.

Se mezcla inmediatamente la sangre con el anticoagulante.

Despues se centrifuga la muestra a 3000rpm durante 10 minutos y se transfiere el plasma.

PRACTICA 15: PT

PRACTICA NUMERO 15

24/01/2018

OBJETIVOS:

Determinación del tiempo de Protrombina.

UTILIDAD CLINICA:

Tromboplastina cálcica de alta sensibilidad para la determinación del Tiempo de Protrombina, para la evaluación de la vía extrínseca de la coagulación y para el control de la terapia Anticoagulante Oral en plasma humano citratado.

FUNDAMENTOS:

Basado en el test de A.Quick, el ensayo mide el tiempo transcurrido hasta la formación del cóagulo después de la mezcla del plasma con Trombloplastina (un extracto de tejido rico en Factor Tisular, fosfolípidos y calcio). La coagulación se inicia por activación del FVII con Factor Tisular.

APARATAJE:

• Coagulometro o cronometro.
• Baño Maria a 37ºC.

REACTIVOS:

• -PT: Tromboplastina de cerebro de conejo, cloruro cálcico, inhibidor de heparina, tampón y conservantes. Liofilizado.

MATERIALES:

• -Pipeta y puntas de pipeta.
• -Tubos de ensayo.

PROCEDIMIENTO:

1. Primero prepararemos el RT, para ello disolvemos un vial  “R” junto con 4 mL de agua destilada.

2.A continuación , calentamos la muestra y el RT (Tromboplastina cálcica) a 37 ºC.

3.Añadimos una bolita  metálica al tubo con la muestra en el  coagulómetro, que será la que vaya girando hasta que se forme el .

4.Mezclamos el RT y añadimos 200 ul en la cubeta del coagulómetro.

5.Incubamos a 37 ºC durante 5 minutos.

6.Pipeteamos 100 ul de plasma.

7.Inmediatamente el coagulómetro se pondrá en funcionamiento y contabilizará el tiempo hasta el coagulo se forme.

RESULTADOS:

El tiempo de coagulación fué y 21,8 segundos, por lo que es un valor que se encuentra un poco por encima de lo normal (13-17 segundos).

Para reviar el instrumental, la técnica y los reactivos también se realizaron los siguientes controles:

-Plasma calibrador coagulación: 12 Segundos.

-Plasma control normal: 12,8 Segundos.

-Plasma control patológico: 33,7 Segundos.

OBSERVACIONES:

Para preparar la muestra para la técnica se debe preparar nueve volúmenes de sangre venosa deben ser mezcladas con un volumen de citrato trisódico. Despues centrifugar la muestra a 2500 rpm durante 15 minutos y tranferir el plasma a contenedores de vidrio.

PRACTICA 14: ATTP

PRACTICA NUMERO 14

22/01/2018

OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa del tiempo de Tromboplastina.

UTILIDAD CLINICA:

La medida del tiempo de APTT, es la determinación mas común junto con la PT, sirve para determinar trastornos de la coagulación y es particularmente sensible a los defectos de la coagulación intrínseca. ( Factores VIII, IX, XI, XII).

Se usa normalmente para la monitorización de las terapias anticoagulantes con heparina.

El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTOS:

Los factores intrínseco de la coagulación se activan en presencia de un complejo fosfolipidico y un activador soluble en plasma citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adicion del cloruro cálcico hasta la formación del coagulo de fibrina.

APARATAJE:

• Coagulometro o cronometro.
• Baño Maria a 37ºC.

MATERIALES:

• -Pipeta y puntas de pipeta.
• -Tubos de ensayo.
• -Vaso de precipitado.
• -Plasma obtenido por puncion venosa diluido 1/10 en solución de citrato trisóico 3,8%.

REACTIVOS:

• -R1 (Activador): Acido elágico, Tampón y conservantes.
• -R2 (Iniciador): Cloruro cálcico.
• -Control Normal.
• -Control Patologico.

PROCEDIMIENTO:

1.Calentar a 37ºC los reactivos y la muestra.

2.Mezclar bien los reactivos sin agitarlos.

3.Pipetear en un tubo de ensayo:

           -TUBO: Plasma citratado 100ul + R1 100ul.

4.Mezclar bien e incubar a 5 minutos a 37ºC ( Tiempo de activación).

5.Colocar el tubo en el coagulómetro y pipetear en el mismo tubo 100ul de R2.

6.Mezclar y añadir una bolita de metal.

7.Poner en marcha el cronometro de tiempo del coagulómetro y medir el tiempo de formación del coagulo a partir de la adición del R2 Iniciador.

RESULTADOS:

El tiempo en el que coaguló mi muestra es de 28´7 segundos.

El tiempo que tardó en coagular el plasma Control es de 31 segundos.

Por tanto se realiza la siguiente ecuación.

Tasa de APTT= 28,7/31: 0.9

*Al realizar el estudio con la muestra problema y como resultado ha sido de 28,7 segundos, quiere decir que son unos valores normales ya que los valores de referencia se encuentran entre 34 y 36 segundos.

OBSERVACIONES:

Esta técnica se utiliza para la motorización de las terapias anticoagulantes con heparina.

PRACTICA 13: RECUENTO DE PLAQUETAS POR MÉTODO DIRECTO.

PRACTICA NUMERO 13

10/01/2018

OBJETIVOS:

Cuantificacion de plaquetas presentes en sangre por el metodo directo en camara de Neuvauer.

UTILIDAD CLINICA:

FUNDAMENTOS:

APARATAJE:

-Microscopio.

MATERIALES:

-Sangre capilar.

-Lancetas.

-Placa de petri.

-Papel de filtro.

REACTIVOS:

-Oxalato Anionico al 1%.

PRODECIMIENTO:

-Coger el tubo con el tapon rojo ( Oxalato Amonico al 1 %) y añadir 20 microlitros de sangre que ha sido recien extraida mediante una lanceta.

-Mezclar suavemente.

-Preparar una camara humeda en una placa de petri con papel de filtro y agua destilada.

-Retirar del envoltorio la camara de Neuvauerr y añadirle 10 microlitros del tubo anterior.

-Introducir 15 minutos la camara de Neuvauer en la camara humeda.

-Visualizar en el microscopio para realizar el contaje de plaquetas.

RESULTADOS:

Cuadro 2: 114 plaquetas.

Cuadro 4: 111 plaquetas.

                                                   225 plaquetas---------0.2 mm3

                                                   x ------------------------1 mm3

                              1125 plaquetas en 1 mm3.

1125 plaqetas en 1 mm3 x 1000= 112500 plaquetas presentes en sangre.

OBSERVACIONES:

Da unos resultados aceptables para la muestra problema.