PRACTICA 16: FIBRINOGENO

PRACTICA NUMERO 16

26/01/2018

OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de Fibrinogeno.

UTILIDAD CLINICA:

El fibrinógeno, proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coagulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismo de coagulación.

La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario se observan valores bajos en terapias tromboliticas…etc.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTOS:

El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina.

El tiempo de formación del coagulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

APARATAJE:

• Coagulometro o cronometro.
• Baño María a 37ºC.

REACTIVOS:

• -R1: Trombina bovina.
• -R2: Tampón Imidazol, Azida sódica.
• -R3: Solucion Caolín.

MATERIALES:

• -Pipeta y puntas de pipeta.
• -Tubos de ensayo.
• -Muestra.

PROCEDIMIENTO:

1.Primero hay que reconstituir en 2 ml de agua destilada el reactivo R1, tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

2. Se prepara una dilución 1/10 de la muestra y los controles en Tampon imidazol.

Por tanto se quedaría de tal manera: 50ul de muestra o control + 450ul de Tampón Imidazol.

3.Despues se preparan las siguientes diluciones del calibrador en Tampón Imidazol.

Dilución del Calibrado	1/40	1/30	1/20	1/10	1/5
Tampón Imidazol (ml)	3.9	2.9	1.9	0.9	0.4
COAGULATION (ml)	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
Factor	10/40*	10/30*	10/20*	10/10*	10/5*
Concentracion (mg/dl)	0.25 x c	0.33 x c	0.5 x c	1 x c	2 x c

4. A 0.2 ml de cada dilución se añade 20ul de R3 y atemperar a 37ºC durante 5 minutos.

5.Se colocan todos los tubos en el coágulometro y se le añade la bolita metalica.

6.Se añade 0.1  ml de R1 y cronometrar la formación de coágulos. No atemperar la trombina R1.

RESULTADOS:

Para saber la concentración de cada tubo y saber que nos puede dar cada tubo he realizado los siguientes cálculos.

-1/40¬ 0.25 x 200 : ( 50 )

-1/30¬ 0.33 x 200 : ( 66 )

-1/20¬ 0.5 x 200: (100)

-1/10¬ 1 x 200 : (200)

-1/5¬ 2 x 200 : ( 400)

Tener en cuenta que, a mayor concentración de fibrinógeno, menos tiempo tardará en coagular.

- Dilución 1/40 = 109,6 mg / dL

- Dilución 1/30 = 97,5 mg/ dL

- Dilución 1/20 = 71,2 mg / dL

- Dilución 1/10 = 31,9mg/ dL

-Dilución 1/5= 20,3 mg7dl.

- Muestra Lorena = 30,9.

- Muestra Yosrra = 10, 5.

- Muestra Mari = 61,8.

-CURVA DE CALIBRACIÓN.

OBSERVACIONES:

La muestra es plasma obtenido por puncion venosa diluido al 1/10 en solución de citrato trisódico 3,8%.

Se mezcla inmediatamente la sangre con el anticoagulante.

Despues se centrifuga la muestra a 3000rpm durante 10 minutos y se transfiere el plasma.