PRACTICA 23: RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA.

PRACTICA NUMERO 23

19/02/2018

OBJETIVOS:

Determinar la resistencia osmótica eritrocitaria.

UTILIDAD CLINICA:

La resistencia osmótica eritrocitaria (ROE) o fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) es una técnica realizada para el estudio de las membranopatias eritrocitarias. Debido a su forma biconcava, los eritrocitos pueden aceptar, sin producir hemolisis, una entrada de agua capaz de aumentar su volumen hasta el 70%.

FUNDAMENTO:

Someter a los hematies a una serie de soluciones salinas hipotonicas de concentracion creciente determinando, a continuacion, el grado de hemólisis en cada una de ellas. En condiciones normales y empleando sangre sin incubar, la hemolisis se inicia a la concentracion de NaCl de 5.5g/L y es practicamente total a la de 3g/L

Esta prueba, auqneu muy util puede verse influida por diversos factores que a aveces dificultan su interpretacion, destacando reticulocitos y la eventual coexistencia de hipocromía.

APARATAJE:

• Espectrofotometrica.

REACTIVOS:

• Solución madre de NaCl de 100 g/L en agua bidestilada
• Soluciones de trabajo.

MATERIALES:

• Muestra de sangre total anticoagulada.
• -Tubos de centrífuga

PROCEDIMIENTO:

1.A partir de la solución madre preparamos las siguientes soluciones de trabajo:

-Solución 1 (1 g/L de NaCl) : 1 mL sol. madre + 99 mL de agua bidestilada

-Solución 2 (3 g/L de NaCl) : 3 mL sol. madre + 97 mL de agua destilada

-Solución 3 (4 g/L de NaCl) : 4 mL sol. madre + 96 mL de agua destilada

-Solución 4 (5 g/L de NaCl) : 5 mL sol. madre + 95 mL de agua destilada

-Solución 5 (6 g/L de NaCl) : 6 mL sol. madre + 94 mL de agua destilada

-Solución 6 (8 g/L de NaCl) : 8 mL sol. madre + 92 mL de agua destilada

-Solución 7 (10 g/L de NaCl) : 10 mL sol. madre + 90 mL de agua destilada

2. Colocamos 5 mL de cada solución en una batería de tubos de centrífuga .

3. Añadimos 25 microlitros de sangre total, agitamos y dejamos a temperatura ambiente durante 45-60 minutos.

4. A continuación centrifugamos a 3000 rpm durante 10 minutos y separamos el sobrenadante.

5. Medimos el grado de hemólisis del sobrenadante en un espectofotómetro a una longitud de onda de 540 nm, considerando el tubo con 1 g/L de NaCl como el 100% de hemólisis y el de 10 g/L de NaCl como el blanco (0% de hemólisis).

RESULTADOS:

 Por último representamos en un papel milimetrado ( en excel) en abscisas los g/L de NaCl  , y en ordenadas el porcentaje de hemólisis de los diferentes tubos , por interpolación se determinan cuál es la concentración de NaCl necesaria para producir una hemólisis del 50 % (H50) , siendo ese valor equivalente a la FOE

Los valores normales están comprendidos entre 3,6-4,2/L NaCl.