PRACTICA 21: HIERRO

PRACTICA NUMERO 21

16/02/2018

OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de hierro.

UTILIDAD CLÍNICA:

El hierro es el constituyente de un gran numero de enzimas. La mioglobinas, proteínas muscular, contiene hierro, así como el hígado.

El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula que transporta el oxigeno en el interior de los glóbulos rojos. Su déficit causa anemia ferropenica. Se encuentras niveles elevados de hierro en la hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda y en concentraciones altas de transferrina. La variación día a día es común en poblaciones sanas.

FUNDAMENTOS:

El hierro se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil. El hierro libre se reduce a ion ferroso mediante el ácido ascórbico. Los iones ferrosos en presencia de FerroZine forma complejo coloreado.

APARATAJE:

• Espectrofotometro.

REACTIVOS:

• R1 ( Tampón ).
• R2 ( Reductor ).
• R3 ( Color ).
• IRON CAL.

MATERIALES:

• Pipeta y puntas de pipeta.
• Cubetas de espectrofotometria.
• Tubos de ensayo.

PROCEDIMIENTO:

1.Preparar el RT, disolver el tubo R2 con un frasco de R1 Tampón.

2.Pipetear en diferentes tubos de ensayo:

      -Blanco reactivo: 1ml RT + 3 gotas de R3 + 200ul agua destilada.

      -Patrón: 1 ml RT + 3 gotas de R3 + 200 ul de patrón.

      -Blanco muestra: 1 ml RT + 200ul muestra.

      -Muestra: 1 ml RT + 200 ul muestra.

3.Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC.

4.Leer las absorbancias de Patron y la muestra frente al blanco de reactivo.

RESULTADOS:

-Blanco reactivo: 0.02.

-Patrón: 0.068.

-Blanco muestra: 0.022.

-Muestra: 0.071.

*Por tanto se realiza el siguiente calculo:

Muestra-Blanco muestra-Blanco Reactivo/ (Patron -blanco reactivo) =114.2UL/dl de hierro.

OBSERVACIONES:

El color es estable como minimo 30 minutos.