PRACTICA NUMERO 16
26/01/2018
OBJETIVOS:
Determinación cuantitativa de Fibrinogeno.
UTILIDAD CLINICA:
El fibrinógeno, proteína sintetizada en el hígado, es un
componente de la sangre utilizado para formar el coagulo. Su determinación nos
ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismo de coagulación.
La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones
agudas y embarazo; por el contrario se observan valores bajos en terapias
tromboliticas…etc.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta
todos los datos clínicos y de laboratorio.
FUNDAMENTOS:
El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se
transforma en fibrina.
El tiempo de formación del coagulo es inversamente
proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de
plasma. La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de
trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas
concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo
en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
APARATAJE:
- Coagulometro o cronometro.
- Baño María a 37ºC.
REACTIVOS:
- -R1: Trombina bovina.
- -R2: Tampón Imidazol, Azida sódica.
- -R3: Solucion Caolín.
MATERIALES:
- -Pipeta y puntas de pipeta.
- -Tubos de ensayo.
- -Muestra.
PROCEDIMIENTO:
1.Primero hay que reconstituir en 2 ml de agua destilada el
reactivo R1, tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
2. Se
prepara una dilución 1/10 de la muestra y los controles en Tampon imidazol.
Por tanto se
quedaría de tal manera: 50ul de muestra o control + 450ul de Tampón Imidazol.
3.Despues se
preparan las siguientes diluciones del calibrador en Tampón Imidazol.
Dilución del Calibrado
|
1/40
|
1/30
|
1/20
|
1/10
|
1/5
|
Tampón Imidazol (ml)
|
3.9
|
2.9
|
1.9
|
0.9
|
0.4
|
COAGULATION (ml)
|
0.1
|
0.1
|
0.1
|
0.1
|
0.1
|
Factor
|
10/40*
|
10/30*
|
10/20*
|
10/10*
|
10/5*
|
Concentracion (mg/dl)
|
0.25 x c
|
0.33 x c
|
0.5 x c
|
1 x c
|
2 x c
|
4. A 0.2 ml
de cada dilución se añade 20ul de R3 y atemperar a 37ºC durante 5 minutos.
5.Se colocan
todos los tubos en el coágulometro y se le añade la bolita metalica.
6.Se añade
0.1 ml de R1 y cronometrar la formación de
coágulos. No atemperar la trombina R1.
RESULTADOS:
Para saber
la concentración de cada tubo y saber que nos puede dar cada tubo he realizado
los siguientes cálculos.
-1/40¬ 0.25
x 200 : ( 50 )
-1/30¬ 0.33
x 200 : ( 66 )
-1/20¬ 0.5 x
200: (100)
-1/10¬ 1 x
200 : (200)
-1/5¬ 2 x
200 : ( 400)
Tener en
cuenta que, a mayor concentración de fibrinógeno, menos tiempo tardará en
coagular.
- Dilución
1/40 = 109,6 mg / dL
- Dilución 1/30
= 97,5 mg/ dL
- Dilución
1/20 = 71,2 mg / dL
- Dilución
1/10 = 31,9mg/ dL
-Dilución
1/5= 20,3 mg7dl.
- Muestra
Lorena = 30,9.
- Muestra
Yosrra = 10, 5.
- Muestra
Mari = 61,8.
OBSERVACIONES:
La muestra
es plasma obtenido por puncion venosa diluido al 1/10 en solución de citrato
trisódico 3,8%.
Se mezcla
inmediatamente la sangre con el anticoagulante.
Despues se centrifuga
la muestra a 3000rpm durante 10 minutos y se transfiere el plasma.