PRACTICA 17: HEMATOCRITO

PRACTICA NUMERO 17

02/02/18

OBJETIVOS:

Metodo directo, determinacion del hematocrito.

UTILIDAD CLINICA:

Se utiliza para cuantificar el volumen medio de hematies presentes en sangre.

FUNDAMENTOS:

El hematocrito es el volumen que ocupan los hematíes con respecto al volumen total de sangre. Se expresa en %, es decir cm3 o ml de hematíes que hay en 100 cm3 de sangre.

APARATAJE:

• Centrifuga de hematocrito.

MATERIALES:

• Capilar desechable
• Lanceta
• -Plastilina
• -Gasas
• -Lector de microhematocrito o regla milimétrica.

PROCEDIMIENTO:

1. Con una lanceta puncionamos en un dedo, que previamente ha sido desinfectado con alcohol.

2. A continuación, ponemos el tubo capilar en contacto con la sangre hasta que se llene por capilaridad 2/3 partes.

3. Taponamos el extremo del capilar más próximo a la sangre con plastilina.

4. Colocamos el tubo en posición opuesta de otro tubo en los surcos radiales del plato de la centrífuga, de forma que el extremo sellado con plastilina quede en la parte exterior.

5. Cerramos la tapa de la centrífuga, ajustamos la velocidad a 12.000 rpm durante unos 5 minutos.

6. Procedemos a realizar la lectura mediante lector de microhematocrito o bien, con una regla milimetrada.

RESULTADOS:

Medición con la regla: 

L1= 4,1

L2= 1,7

Hematocrito (%)= (1.7/4)*100 = 42,5€ de hematies

-Valores normales:

El valor medio en hombres es de 40% a 50%

El valor medio en mujeres es de 37% a 47%

El valor medio del recién nacido es de 44% a 64%

Me encuentro dentro de los valores normales.

PRACTICA 16: FIBRINOGENO

PRACTICA NUMERO 16

26/01/2018

OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de Fibrinogeno.

UTILIDAD CLINICA:

El fibrinógeno, proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coagulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismo de coagulación.

La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario se observan valores bajos en terapias tromboliticas…etc.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTOS:

El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina.

El tiempo de formación del coagulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

APARATAJE:

• Coagulometro o cronometro.
• Baño María a 37ºC.

REACTIVOS:

• -R1: Trombina bovina.
• -R2: Tampón Imidazol, Azida sódica.
• -R3: Solucion Caolín.

MATERIALES:

• -Pipeta y puntas de pipeta.
• -Tubos de ensayo.
• -Muestra.

PROCEDIMIENTO:

1.Primero hay que reconstituir en 2 ml de agua destilada el reactivo R1, tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

2. Se prepara una dilución 1/10 de la muestra y los controles en Tampon imidazol.

Por tanto se quedaría de tal manera: 50ul de muestra o control + 450ul de Tampón Imidazol.

3.Despues se preparan las siguientes diluciones del calibrador en Tampón Imidazol.

Dilución del Calibrado	1/40	1/30	1/20	1/10	1/5
Tampón Imidazol (ml)	3.9	2.9	1.9	0.9	0.4
COAGULATION (ml)	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
Factor	10/40*	10/30*	10/20*	10/10*	10/5*
Concentracion (mg/dl)	0.25 x c	0.33 x c	0.5 x c	1 x c	2 x c

4. A 0.2 ml de cada dilución se añade 20ul de R3 y atemperar a 37ºC durante 5 minutos.

5.Se colocan todos los tubos en el coágulometro y se le añade la bolita metalica.

6.Se añade 0.1  ml de R1 y cronometrar la formación de coágulos. No atemperar la trombina R1.

RESULTADOS:

Para saber la concentración de cada tubo y saber que nos puede dar cada tubo he realizado los siguientes cálculos.

-1/40¬ 0.25 x 200 : ( 50 )

-1/30¬ 0.33 x 200 : ( 66 )

-1/20¬ 0.5 x 200: (100)

-1/10¬ 1 x 200 : (200)

-1/5¬ 2 x 200 : ( 400)

Tener en cuenta que, a mayor concentración de fibrinógeno, menos tiempo tardará en coagular.

- Dilución 1/40 = 109,6 mg / dL

- Dilución 1/30 = 97,5 mg/ dL

- Dilución 1/20 = 71,2 mg / dL

- Dilución 1/10 = 31,9mg/ dL

-Dilución 1/5= 20,3 mg7dl.

- Muestra Lorena = 30,9.

- Muestra Yosrra = 10, 5.

- Muestra Mari = 61,8.

-CURVA DE CALIBRACIÓN.

OBSERVACIONES:

La muestra es plasma obtenido por puncion venosa diluido al 1/10 en solución de citrato trisódico 3,8%.

Se mezcla inmediatamente la sangre con el anticoagulante.

Despues se centrifuga la muestra a 3000rpm durante 10 minutos y se transfiere el plasma.

PRACTICA 15: PT

PRACTICA NUMERO 15

24/01/2018

OBJETIVOS:

Determinación del tiempo de Protrombina.

UTILIDAD CLINICA:

Tromboplastina cálcica de alta sensibilidad para la determinación del Tiempo de Protrombina, para la evaluación de la vía extrínseca de la coagulación y para el control de la terapia Anticoagulante Oral en plasma humano citratado.

FUNDAMENTOS:

Basado en el test de A.Quick, el ensayo mide el tiempo transcurrido hasta la formación del cóagulo después de la mezcla del plasma con Trombloplastina (un extracto de tejido rico en Factor Tisular, fosfolípidos y calcio). La coagulación se inicia por activación del FVII con Factor Tisular.

APARATAJE:

• Coagulometro o cronometro.
• Baño Maria a 37ºC.

REACTIVOS:

• -PT: Tromboplastina de cerebro de conejo, cloruro cálcico, inhibidor de heparina, tampón y conservantes. Liofilizado.

MATERIALES:

• -Pipeta y puntas de pipeta.
• -Tubos de ensayo.

PROCEDIMIENTO:

1. Primero prepararemos el RT, para ello disolvemos un vial  “R” junto con 4 mL de agua destilada.

2.A continuación , calentamos la muestra y el RT (Tromboplastina cálcica) a 37 ºC.

3.Añadimos una bolita  metálica al tubo con la muestra en el  coagulómetro, que será la que vaya girando hasta que se forme el .

4.Mezclamos el RT y añadimos 200 ul en la cubeta del coagulómetro.

5.Incubamos a 37 ºC durante 5 minutos.

6.Pipeteamos 100 ul de plasma.

7.Inmediatamente el coagulómetro se pondrá en funcionamiento y contabilizará el tiempo hasta el coagulo se forme.

RESULTADOS:

El tiempo de coagulación fué y 21,8 segundos, por lo que es un valor que se encuentra un poco por encima de lo normal (13-17 segundos).

Para reviar el instrumental, la técnica y los reactivos también se realizaron los siguientes controles:

-Plasma calibrador coagulación: 12 Segundos.

-Plasma control normal: 12,8 Segundos.

-Plasma control patológico: 33,7 Segundos.

OBSERVACIONES:

Para preparar la muestra para la técnica se debe preparar nueve volúmenes de sangre venosa deben ser mezcladas con un volumen de citrato trisódico. Despues centrifugar la muestra a 2500 rpm durante 15 minutos y tranferir el plasma a contenedores de vidrio.

PRACTICA 14: ATTP

PRACTICA NUMERO 14

22/01/2018

OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa del tiempo de Tromboplastina.

UTILIDAD CLINICA:

La medida del tiempo de APTT, es la determinación mas común junto con la PT, sirve para determinar trastornos de la coagulación y es particularmente sensible a los defectos de la coagulación intrínseca. ( Factores VIII, IX, XI, XII).

Se usa normalmente para la monitorización de las terapias anticoagulantes con heparina.

El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTOS:

Los factores intrínseco de la coagulación se activan en presencia de un complejo fosfolipidico y un activador soluble en plasma citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adicion del cloruro cálcico hasta la formación del coagulo de fibrina.

APARATAJE:

• Coagulometro o cronometro.
• Baño Maria a 37ºC.

MATERIALES:

• -Pipeta y puntas de pipeta.
• -Tubos de ensayo.
• -Vaso de precipitado.
• -Plasma obtenido por puncion venosa diluido 1/10 en solución de citrato trisóico 3,8%.

REACTIVOS:

• -R1 (Activador): Acido elágico, Tampón y conservantes.
• -R2 (Iniciador): Cloruro cálcico.
• -Control Normal.
• -Control Patologico.

PROCEDIMIENTO:

1.Calentar a 37ºC los reactivos y la muestra.

2.Mezclar bien los reactivos sin agitarlos.

3.Pipetear en un tubo de ensayo:

           -TUBO: Plasma citratado 100ul + R1 100ul.

4.Mezclar bien e incubar a 5 minutos a 37ºC ( Tiempo de activación).

5.Colocar el tubo en el coagulómetro y pipetear en el mismo tubo 100ul de R2.

6.Mezclar y añadir una bolita de metal.

7.Poner en marcha el cronometro de tiempo del coagulómetro y medir el tiempo de formación del coagulo a partir de la adición del R2 Iniciador.

RESULTADOS:

El tiempo en el que coaguló mi muestra es de 28´7 segundos.

El tiempo que tardó en coagular el plasma Control es de 31 segundos.

Por tanto se realiza la siguiente ecuación.

Tasa de APTT= 28,7/31: 0.9

*Al realizar el estudio con la muestra problema y como resultado ha sido de 28,7 segundos, quiere decir que son unos valores normales ya que los valores de referencia se encuentran entre 34 y 36 segundos.

OBSERVACIONES:

Esta técnica se utiliza para la motorización de las terapias anticoagulantes con heparina.

PRACTICA 13: RECUENTO DE PLAQUETAS POR MÉTODO DIRECTO.

PRACTICA NUMERO 13

10/01/2018

OBJETIVOS:

Cuantificacion de plaquetas presentes en sangre por el metodo directo en camara de Neuvauer.

UTILIDAD CLINICA:

FUNDAMENTOS:

APARATAJE:

-Microscopio.

MATERIALES:

-Sangre capilar.

-Lancetas.

-Placa de petri.

-Papel de filtro.

REACTIVOS:

-Oxalato Anionico al 1%.

PRODECIMIENTO:

-Coger el tubo con el tapon rojo ( Oxalato Amonico al 1 %) y añadir 20 microlitros de sangre que ha sido recien extraida mediante una lanceta.

-Mezclar suavemente.

-Preparar una camara humeda en una placa de petri con papel de filtro y agua destilada.

-Retirar del envoltorio la camara de Neuvauerr y añadirle 10 microlitros del tubo anterior.

-Introducir 15 minutos la camara de Neuvauer en la camara humeda.

-Visualizar en el microscopio para realizar el contaje de plaquetas.

RESULTADOS:

Cuadro 2: 114 plaquetas.

Cuadro 4: 111 plaquetas.

                                                   225 plaquetas---------0.2 mm3

                                                   x ------------------------1 mm3

                              1125 plaquetas en 1 mm3.

1125 plaqetas en 1 mm3 x 1000= 112500 plaquetas presentes en sangre.

OBSERVACIONES:

Da unos resultados aceptables para la muestra problema.

PRACTICA 12:TARJETA CON REACTIVOS DESHIDRATADOS PARA DETECCION DE GRUPO SANGUINEO.

PRACTICA NUMERO 12

15/12/17

OBJETIVOS:

Determinacion del grupo sanguineo mediante tarjetas con reactivos deshidratados.

FUNDAMENTOS:

El test esta basado en la hemaglutinacion directa. Los anticuerpos reactivos secos presentes en la tarjeta aglutinarian los eritrocitos con los correspodientes antigenos. La falta de aglutinacion en un campo indica la ausencia del antigeno correspondiente.
El grupo sanguineo del individuo al cual se le realiza el test se determina a partir del patron de aglutinacion en la Eldon Card.

REACTIVOS:

-El campo azul anti-A contiene Ig-M monoclonal murina anti-A de la linea celular Birma-1.
-El campo anti-B contiene Ig-M monoclonal murina anti-B de la linea LB-2.
-El campo anti-D contiene Ig-M humano anti-D de la linea Ms-201.
-El campo control no contiene anticuerpos, pero si el mismmo PBS que los otros campos y un colorante azul.

MATERIALES:

-Agua destilada.
-Tarjeta ELDON DOCTOR KIT DKS 2511.
-Sangre capilar.

PROCEDIMIENTO:

-Rellenar los datos del paciente al que va ha realizar el analisis.
-Aplique una gota de agua dentro de cada area reactiva coloreada utilizando una pipeta.
-Desinfecte la zona del dedod donde va a realizar la puncion y deje secar al aire el dedo.
-Realice la puncion presionando la lanceta firmemente sobre la punta del dedo en la cara que se encuentre en direccion al dedo meñique.
-Masajee suavemente el dedo donde se realizo la puncion con el fin de obtener una gota de sangre. Recoja la gota de sangre sobre un EldonStick el cual aproximira por debajo de la gota del dedo.
-Mezclar las sangre en los circulos con la gota de agua y esperar a que el reactivo se disuelva.
-Extender la sangre por todo el circulo.
-Para desarrollar aglutinacion la tarjeta debe rotar durante unos 40 segundos.
-Los resultados se leen al momento.
-Si queremos conservar la tarjeta con los resultados, la dejamos secar sobre una superficie.

RESULTADO:

El resultado es A+, aunque el Anti-D no se puede apreciar mucho.

PRACTICA 11: PRUEBAS CRUZADAS

PRACTICA NUMERO 11

1/12/2017

OBJETIVOS:

El objetivo es detectar los posibles anticuerpos que se hallen fijados a la membrana de los hematíes con antiglobulina humana.

FUNDAMENTOS:

Esta prueba sirve para determinar la compatibilidad sanguínea enfrentando el suero del receptor con los hematíes del donante. (Prueba cruzada mayor).

APARATAJE:

-Centrifuga.

MATERIALES:

• Pipetas
• Centrifuga
• Tubos de ensayo y gradilla
• Vaso precipitado

REACTIVOS:

• Antiglobulina humana
• Suspensión de hematíes (donante)
• Suero (receptor)
• Solución salina fisiológica
• Albúmina

PROCEDIMIENTOS:

-En el primer tubo (tubo salino) añadimos 2 gotas de suspensión de hematíes al 2% y 2 gotas del suero e incubamos a tª ambiente durante 30 minutos.
-En el segundo tubo (tubo proteico) añadimos 2 gotas de suspensión de hematíes al 2%, 2 gotas del suero y 2 gotas de albúmina e incubamos a 37 ºC durante 30 minutos.

-Transcurrido el tiempo centrifugamos los dos tubos a 1000 rpm durante 1 minuto.

-Si en el primer tubo (salino) hay aglutinación es que las dos muestras son incompatibles y si no existe aglutinación son compatibles.

-Si en el tubo proteico existe aglutinación la muestra no es compatible, pero si no existe aglutinación hay que confirmarlo, para ello:

-Lavamos 3 veces con solución salina y a continuación añadimos 2 gotas de antiglobulina (Coombs).

-Centrifugamos 1000 rpm durante 1 minuto y vemos el resultado.

 

-Si existe aglutinación las dos muestras son incompatibles y si no existe aglutinación son compatibles.

RESULTADOS:

Resuspendemos el botón hemático después de centrifugar y observamos la aglutinación.

Tubo salino después de centrifugar

Tubo proteico después de añadir el Coombs y centrifugar

Como se observa en la imagen no existe aglutinación en ningún tubo (los dos estaban iguales), lo que quiere decir las dos muestras son compatibles.

OBSERVACIONES:

Pueden transfundirse sangre.